“這里是實驗室,你跟著我們的工作人員一步一步來做,或許你就會明白DNA鑒定是怎么回事。”上海親子鑒定中心法醫物證司法鑒定所助理研究員張宇跟記者說了多遍操作流程,記者還是無法理解。隨后,他讓記者跟隨劉軍、楊麗兩位實驗人員進入實驗室,一步步見證DNA鑒定結果是如何出爐的。 第一步:待檢準備 唾液飛沫絕不能混入 走入該鑒定所實驗室的大門前,記者被要求套了鞋套并換上消毒干凈的服裝。實驗人員則全副武裝:一次性的帽子、口罩、手套,一樣都不能少。 進入實驗區域后,記者發現了一個有趣的現象:實驗室的走廊外,畫著一個個醒目的前行箭頭。據介紹,進入實驗室的人,必須要嚴格按照這地上的箭頭行進;而且,每進一個房間,就要換不同的衣服,誰也不可走“回頭路”。“這主要是為了預防實驗室細菌的交叉傳染,確保DNA準確率。”楊麗說。 “帽子要戴到頭發不外露的程度,口罩就不用說了,手套也要包住袖口。”劉軍說,這些都是為了讓檢材不受到任何影響。為了說明這個問題,他舉了個例子:在很多年以前,有個同事做DNA鑒定,由于沒戴口罩,同事的唾液飛沫掉進了裝DNA樣本的小試管里。最后檢出的結果里邊,居然有這個同事的DNA信息。換句話說,這次實驗失敗了。 第二步:DNA提取 100℃下孵育10分鐘逼出DNA 目前,最為常見的是通過血液進行DNA鑒定,也就是說,要采集血樣做鑒定。 “試管內我們已經提前放入了DNA提取液。”楊麗說,血液標本內有紅細胞、白細胞及雜質等諸多東西,提取液的作用是將DNA提取出來,并去除其他的物質。 提取完成后,要把小試管放入干式恒溫器。“這一步的作用是孵育DNA,孵育環境是100℃的溫度,時長是10分鐘。”劉軍說,通過孵育,NDA將充分暴露,更方便提取。
第三步: 冰箱冷藏 試劑和DNA樣本充分混合 取樣完成后,要將DNA 的提取物放到冰箱冷藏備用。等提取物冷卻后,再拿出一個更小的試管,這個新試管當中有從試劑盒中調配的試劑。 這是最為費錢的一步,因為試劑盒是進口的,每次加入的試劑費用就要數百元 。在進入加樣區之前,實驗人員先是打開了紫外線消毒燈。“現在要對整個房間進行消毒,確保加樣房間沒有任何的病菌及粉塵等,實驗者也盡量不要說話。” 實驗人員提醒道。 試劑里邊包括酶、引物等試劑,每個試管要加入0.2微升。加入試劑后,要將小試管放入小的混合器,讓試劑和DNA樣本充分混合。 第四步:擴增 DNA提取物不斷繁殖分裂 為了能達到檢測需求的量,要把小試管放入一個叫做擴增儀的儀器。把試管放入擴增儀后,里邊的DNA提取物將不斷繁殖、分裂。 在一般情況下,經過2-3個小時的擴增,DNA提取物的量就能達到檢測量。也就是說,要真正進行DNA 檢測、比對了。 第五步:檢測 提取16個位點數據進行比對 檢測是在一個叫做310熒光自動測序儀當中進行的,這種設備非常先進,把擴增完的小試管放入儀器后,設備會自動從試管中提取DNA提取物,然后自動選擇DNA位點,分析染色體。在一般情況下,設備會自動提取16個位點,然后,系統自動將需要做親子鑒定的兩個樣本進行自動比對。 根據遺傳學原理,如果所有的位點遺傳信息都能匹配成功,我們也就能大概說,這對父子或者母子是親子關系。即便有一兩個位點不能成功匹配,在一般情況下,也能作出否定的結論。“每個人都會有兩條染色體,一條是父親給予的,另一條是母親給予的。在同一個點位上也會出現兩條相同的數值,一個數值來自母親,另一個數值來自父親。如果孩子有的數值父親和母親的都沒有,那么他們就很有可能不是親子關系。”當然,這是最簡單、最直觀的看法,要判斷孩子是否是親生,還要經過更加嚴謹的計算。 計算時,有個親權指數 (PI) 計算,因為在該公式類似于(p除以p+1)的模式,這個模式決定其結果不可能是整數。而且,因為世上沒有絕對相同的DNA,因此大概只能算出約99.9%的準確率。
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